胶乳微球 -物理吸附粒子 抗体偶联反应方法
来源：长濑体外诊断IVD物理吸附 抗体吸附反应方法（示例）
1、材料◆聚苯乙烯胶乳粒子（10 wt%产品）◆反应缓冲液；10 mM HEPES (pH 7.0) 50mM磷酸及硼酸、甘氨酸溶液亦可 pH6~8之间最适宜◆抗体；精制抗体 /PBS(尽量3mg/mL以上)◆封闭液；1 wt% BSA /10 mM MES(pH 6.5)◆试剂保存液；0.1wt%BSA、10 mM HEPES(pH 7.0)、3%蔗糖、0.09%NaN₃ etc.
2、抗体吸附反应示例1）向微管中加入10%胶乳原液50μL，反应缓冲液950μL，并稀释至0.5wt%（5 mg/mL）2）参考表格，适量添加抗体，用超声波装置分散，混合1小时(室温)3）参考表格进行离心并去除上清4）加入1mL封闭液，使用超声波装置再次进行分散后，去除离心上清(去除未吸附抗体)5）加入1mL封闭液，使用超声波再次进行分散后，混合1小时(室温~50℃)6）离心并去除上清7）在试剂保存液中，进行分散，使其变为可发挥试剂性能的浓度
※变更调制量时，请适当调整最佳抗体量、离心时间。
粒子直径100nm200nm300nm
添加抗体量（0.5wt%1mL）0.7mg0.4mg0.3mg
离心条件20,000G(15,000rpm)20,000G(15,000rpm)20,000G(15,000rpm)
离心时间1小时以上约30分钟约20分钟
※上述表格基于粒子表面积计算得出，数值为大概标准，请知悉。
物理微球与化学微球的性质：物理微球较化学微球灵敏度高，但操作难度较大
物理因微球本身具有疏水性，疏水性的各粒子形成了易于结合的环境。抗原抗体反应＋粒子自身持有的凝集倾向＝高敏感度
化学功能基与水融合，粒子本身的凝集力降低。凝集反应仅有抗原抗体反应的作用＝常规敏感度
对于偶联的操作性和分散稳定性，化学方式容易些。
物理微球与化学微球的区别（假设/形象图）
FC部分因具有疏水性，易吸附于Lx？
化学粒子～COOH基量与试剂性能～
聚苯乙烯粒子与大量的酸共聚合时，理论上，按照COOH基量的比例，抗体进行化学结合。
＊变得更易溶于水，粒子凝集力下降＊聚苯乙烯高折射率的的性质丧失（配比率的数倍）不利于试剂性能的提高
微球总结
微球种类微球直径功能基种类抗体结合方式用量
物理吸附用粒子50-400nm磺酰基、羟基物理吸附（静电、疏水性的结合）500 mL～
化学结合用粒子100-400nm羧基共价键500 mL～
如通过样品评价，可确认试剂性能，则可以对最终粒子直径进行微调。
藤仓化成胶乳微球小结
[*]根据目前测试情况，化学羧基微球方面对于小粒径的微球，羧基比例高一些的实测效果更好些（比如FK-C100E/120E），对于粒径比较大的微球，羧基比例低一些的实测效果更好些（比如FK-C300D/350D/400D）
[*]物理吸附微球方面FK-S100D/S120D/S200D/S300D使用性能比较优异。
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