佰桥产品推荐——甲状腺素(T4)
本帖最后由 biobridge 于 2023-8-18 10:33 编辑THYROXIN 4 ANTIBODY 甲状腺素抗体
甲状腺素（Thyroxin，T4）是甲状腺分泌的激素之一。在正常生理条件下，血液中约99.95%的T4与甲状腺素结合蛋白（TBG）结合起来，只有0.05%游离态T4（FT4）具有生物学活性。临床检验项目甲功五项包括游离三碘甲腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、总甲状腺素（TT4）、总三碘甲腺原氨酸（TT3）、促甲状腺素（TSH）五项指标，它与甲状腺功能有密切关系，是诊断甲状腺功能亢进症、甲状腺功能减退症的重要依据。目前，检测人血清中T4浓度的方法有色谱法、放射免疫法、酶免法。色谱法准确可靠，是其他测定T4方法的参考标准，但是这种方法费时、费用高，不适合于常规临床实验室常规检测病人。放射免疫法所用试剂具有放射性同位素，存在安全问题，不易被广泛应用于临床检测。酶免法避免了以上两种方法的弊端，便于在基层医院普及和推广，其中化学发光酶免法成为主流。而建立酶免法的关键在于制备出特异性强、亲和力高的单克隆抗体。
我公司自主研发的抗甲状腺素（T4）单克隆抗体有两株，抗体克隆号分别是1E10和9C6。9C6的检测灵敏度高，与样本的检测相关性在0.95左右（检测FT4浓度）。1E10效价高，用户在使用过程中可减少抗体的使用量，降低原料成本，与样本的检测相关性在0.95左右（检测TT4浓度）。●佰桥产品自信
产品货号：M-1171-1E10
M-1171-9C6
使用方法：标记、包被
应用平台：
胶体金、荧光层析、化学发光
实验一 抗体9C6用于标记检测FT4（化学发光）
实验方法：采用竞争法，在板式化学发光平台上检测血清样本的发光值，做出发光值与血清样本中FT4浓度（西门子试剂盒测定）的相关性曲线。
包被将T4-BSA包被于微孔板上，包被浓度0.5μg/mL，每孔加入100μL，4℃包被过夜；
封闭将微孔板清洗3遍后，每孔加入200μL的封闭液，37℃封闭2h，洗板3遍；
加样每孔分别加入50μL血清样本，再加入100μL HRP-9C6(1:40000稀释)，37℃孵育60min；
加入发光液洗板4遍后，每孔加入100μL发光底物，室温避光反应5min；
读数化学发光检测仪检测发光值；实验结果：检测数据
样本编号样本FT4浓度pg/ml9C6-20211118检测发光值
10760585
20.33619830
31.51558120
41.79565255
52.36597980
62.96592725
74.97522230
87.83395955
98.68430405
109.09367225
119.66374270
1213.71298600
1314.14315795
1414.86268730
1515.71210925
1616.13292185
1725.52180525
1830.6156295
1932.12138225
2037.49100675
2142.4688705
2252.4962715
2361.452085
2477.4623640
2586.1346140
2694.331575
2794.329040
28128.3317360
曲线拟合：以FT4浓度（单位pmol/L）为X轴，发光值为Y轴，做四参数Logistic曲线拟合，如下图所示：四参数Logistic曲线拟合方程: y = (A - D) / + DA = 616555.32189B = 1.50884C = 13.20267D = 166.99578R2= 0.98893实验结论在化学发光平台上，自产抗体9C6用于标记，检测血清样本的发光值与血清样本中FT4浓度（西门子试剂盒测定）的相关性R2＞0.95。
实验二 抗体9C6用于包被检测FT4（化学发光）
实验方法：采用竞争法，在板式化学发光平台上检测血清样本的发光值，做出发光值与血清样本中FT4浓度（西门子试剂盒测定）的相关性曲线。
包被将9C6抗体包被于微孔板上，包被浓度2μg/mL，每孔加入100μL，4℃包被过夜；
封闭将微孔板清洗3遍后，每孔加入200μL的封闭液，37℃封闭2h，洗板3遍；
加样每孔分别加入50μL血清样本，再加入100μL HRP-T4(适当稀释)，37℃孵育45min；
加入发光液洗板4遍后，每孔加入100μL发光底物，室温避光反应1-3min；
读数化学发光检测仪检测发光值；实验结果：检测数据:
样本编号样本FT4浓度pg/ml9C6-20211118检测发光值
10753625
22.91623915
33.48573285
45.09575075
55.69568000
67.56565405
77.84524400
88.49581225
98.98590940
109.51541650
119.97528100
1212.33510115
1314.1494400
1416.68443130
1518.26397885
1621.87455675
1725.26354210
1832.29315675
1937.31312815
2038.64226820
2144.99183240
2249.64183870
2360.14135280
2468.85128055
2577.83115510
2678.4596085
27103.3456585
28123.0349585
曲线拟合：以FT4浓度（单位pmol/L）为X轴，发光值为Y轴，做四参数Logistic曲线拟合，如下图所示：
四参数Logistic曲线拟合方程: y = (A - D) / + DA = 701755.87902B = 1.03322C = 38.24979D = -172362.71044R2= 0.97746实验结论在化学发光平台上，自产抗体9C6用于包被，检测血清样本的发光值与血清样本中FT4浓度（西门子试剂盒测定）的相关性R2＞0.95。
实验三 抗体1E10用于包被检测TT4（化学发光）
实验方法：
采用竞争法，在板式化学发光平台上检测血清样本的发光值（样本需要解离），做出发光值与血清样本中TT4浓度（西门子试剂盒测定）的相关性曲线。
包被将1E10抗体包被于微孔板上，包被浓度0.5μg/mL，每孔加入100μL，4℃包被过夜；
封闭将微孔板清洗3遍后，每孔加入200μL的封闭液，37℃封闭2h，洗板3遍；
加样每孔分别加入50μL血清样本，再加入100μL HRP-T4(适当稀释)，37℃孵育45min；
加入发光液洗板4遍后，每孔加入100μL发光底物，室温避光反应1-3min；
读数化学发光检测仪检测发光值；实验结果：检测数据:
样本编号样本TT4浓度ng/ml1E10-20211122检测发光值
10.2954370
22.96835050
33.1942260
43.9932900
526.4799945
638.9647865
744.5578255
850.6661460
953.3628725
1089.8453180
1190.1510915
12105.8469610
13114.8436140
14123.3454810
15136.8359065
16151.5425670
17233.5267675
18238.5256920
19247.6265750
20248.1241770
21291.1240175
22299.9168250
23326.6180165
24377185335
25377195010
曲线拟合：以TT4浓度（单位nmol/L）为X轴，发光值为Y轴，做四参数Logistic曲线拟合，如下图所示：
四参数Logistic曲线拟合方程: y = (A - D) / + DA = 945011.89147B = 0.93002C = 122.76832D = -101349.90267R2= 0.98065实验结论
在化学发光平台上，自产抗体1E10用于包被，检测血清样本的发光值与血清样本中TT4浓度（西门子试剂盒测定）的相关性R2＞0.95。
实验四 抗体1E10用于标记检测TT4（荧光层析）
实验方法：
包被T4-BSA，1E10用于标记，采用竞争法，在荧光层析平台上检测血清样本的荧光强度T/C（样本需要解离），做出荧光强度T/C与血清样本中TT4浓度（西门子试剂盒测定）的相关性曲线。实验结果：检测数据:
样本编号样本TT4浓度ng/mlC值T值T/C
1395015751.6579
23.972715152.0839
33.976614831.9360
46.4142519961.4007
533.4154112890.8365
650.610815510.5097
754.114029260.6605
856.812196830.5603
956.9198811570.5820
1083.2174013180.7575
11102.219138040.4203
12103.621099320.4419
1310518148180.4509
14136.813243870.2923
15165.719237150.3718
16233.521084050.1921
17236.719923770.1893
1824717324700.2714
19248.116234810.2964
20248.117843000.1682
21256.315142800.1849
22326.315841950.1231
2337712871270.0987
曲线拟合：以TT4浓度（单位nmol/L）为X轴，荧光强度T/C为Y轴，做四参数Logistic曲线拟合，如下图所示：
四参数Logistic曲线拟合方程: y = (A - D) / + DA = 3.59163B = 0.49843C = 5.21878D = -0.27958R2= 0.95689实验结论
在荧光层析平台上，自产抗体1E10用于标记，检测血清样本的荧光强度T/C与血清样本中TT4浓度（西门子试剂盒测定）的相关性R2＞0.95。
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