【新冠病毒快速诊断】Abbott|基于NEAR技术的COVID-19快速诊断

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美国雅培（Abbott）推出新型冠状病毒检测方案，仅需5分钟就能得到结果，无需往返于实验室。该方案已获得美国FDA紧急批准， 并将在下周开始生产。




据悉，雅培（Abbott）ID NOW分子诊断平台已经收到美国FDA的紧急使用授权（EUA），用于COVID-19诊断。厂家现已加大生产力度，从下周开始将每天向美国医疗系统提供5万次检测，预计4月份将生产500万个测试，以便帮助筛查感染人群。

ID NOW分子诊断平台技术上基于缺口内切酶扩增反应（nicking endonuclease amplification reaction，NEAR）技术，提供超快速DNA或RNA扩增，与荧光检测结合，能在13分钟或更短的时间内得到细菌或病毒检测结果（5分钟内得出阳性结果，15分钟内确定阴性结果）。

ID NOW™ COVID-19靶向冠状病毒SARS-COV-2的RdRp基因。用自制的临床鼻咽拭子评价ID NOW™ COVID-19的性能。样本是纯化的患者标本病毒RNA制作的鼻咽拭子，浓度约为2倍和5倍的SARS-CoV-2基因组【1】。



工作原理
NOW COVID-19 检测的前身是ID Now流感A & B检测（原名Alere i流感A/B），是FDA批准的流感快速即时检测系统，之前已经在美国各大医院推广使用。ID Now是一种采用缺口内切酶扩增反应（nicking endonuclease amplification reaction，NEAR）技术的等温核酸扩增【2】。
当检测目标为冠状病毒RNA时，其驱动力是两条模板（类似引物）和三种酶（耐热DNA聚合酶、逆转录酶和耐热缺口核酸内切酶），提供短扩增子的指数扩增，短时间内完成检测。



如图所示
A（1a）T2的识别区与互补靶区结合
A（2a）聚合酶沿靶区延伸
A（3a）第二个T2与同一目标结合并延伸，取代第一个T2
A（4a）T1的识别区与释放链中的互补链结合并延伸至5′端，形成双链缺口酶识别位点
A（5a）缺口酶结合并剪切（用剪刀表示）
A（6a）聚合酶沿着T1合成被切割的3′OH，取代剩余的靶互补链，最后延伸的双链复合物称为NEAR扩增双链
B（1a）缺口酶与两个识别位点结合
B（2a）两个位点的裂解和链位移产生两个复合物，每个复合物由一个双稳定区、一个缺口酶识别区和一个单链靶标组成
B（3a）重复切割、聚合和链置换，裂解聚合物被再生
B（4a）产物1和产物2分别退火到T1和T2，导致双向延伸和双链，模板和dNTPs或酶耗尽时反应结束
ID NOW最初是为检测流感A&B、链球菌A和呼吸道合胞病毒于2014年首次推出的先进分子诊断平台。之前的前瞻性比较研究显示【3】，扩增反应和分析软件都进行了重大改良后的ID Now流感A & B对流感病毒A/B的检测灵敏度为93.2%/97.2%，特异性均大于97%。与实时RT-PCR检测平台对比（赛沛Xpert Xpress Flu assay和罗氏Cobas influenza A/B nucleic acid test），ID Now检测平台的无效率最低（0.5%），且获得阳性样本的时间更短。目前ID NOW™ COVID-19仅供应美国市场。

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参考文献：
1.ID NOW COVID-19 Quick Reference Instructions
2.Evaluation of Alere i Influenza A&B for Rapid Detection of Influenza
Viruses A and B
3.Comparison of the ID Now Influenza A & B 2, Cobas Influenza A/B, and Xpert Xpress Flu Point-of-Care Nucleic Acid Amplification Tests for Influenza A/B Virus Detection in Children.
来源生物通