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1、唾液样本：
1.1、 唾液一般饭后半小时内不易采集，因为刚进食的唾液中富含丰富的唾液淀粉酶，最好的采集的时间时空腹采集；
1.2、将样品收集于离心管后在-70 度冰冻 1 小时。在冰上融化样品后， 10000rpm 离心 10 分钟，取上清检测；
1.3、处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程，由于蛋白容易变性，降解，故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要，尤其注意不要反复冻融，样本处理之后可分装密封保存，4 度保存应小于 1 周，-20 度不应超过 1 个月，-80 度不应超过 2 个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。
2、尿液样本：
2.1、无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心；
2.2、处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程，由于蛋白容易变性，降解，故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要，尤其注意不要反复冻融，样本处理之后可分装密封保存，4 度保存应小于 1 周，-20 度不应超过 1 个月，-80 度不应超过 2 个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。
3、精液样本：
3.1、将精液收集于无菌容器中，正常精液射出体外呈稠厚的胶冻状，射出体外后需在室温或 37 度水浴箱中使其在前列腺分泌的纤维蛋白溶解酶的作用下液化，变的稀薄。待精液完全液化后，将精液 4000 rpm 离心 10 分钟分离精浆进行检测；
3.2、处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程，由于蛋白容易变性，降解，故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要，尤其注意不要反复冻融，样本处理之后可分装密封保存，4 度保存应小于 1 周，-20 度不应超过 1 个月，-80 度不应超过 2 个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。
4、粪便样本：
4.1、尽量采集干的粪便，粪便过稀会较难处理且降低检测的准确性。采集的重量应大于 50 mg，将粪便用 PBS 洗 3 次（最终粪便质量：PBS 体积=1:9），用超声粉碎（或捣碎）后于 5000×g 离心 10 分钟，取上清检测；
4.2、处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程，由于蛋白容易变性，降解，故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要，尤其注意不要反复冻融，样本处理之后可分装密封保存，4 度保存应小于 1 周，-20 度不应超过 1 个月，-80 度不应超过 2 个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。
5、肺泡灌洗液、脑脊液样本：
5.1、样本收集后于 1000g 离心 20 分钟，离心后收集上清，并将标本保存于-20度，且应避免反复冻融；
5.2、处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程，由于蛋白容易变性，降解，故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要，尤其注意不要反复冻融，样本处理之后可分装密封保存，4 度保存应小于 1 周，-20 度不应超过 1 个月，-80 度不应超过 2 个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。
6、痰液样本：
6.1、选择痰液中较为粘稠部分称重， 加两倍于痰量的 0.1% DTT(二硫苏糖醇)。DTT 的主要作用是溶解粘液，用吸管反复吹打，漩涡器振荡 15s，37 度恒温水浴振荡 5 分钟；
6.2、加入两倍于痰量的 PBS 缓冲液继续振荡 15-20 分钟，150 目的金属丝网过滤，1500 rpm 离心 10 分钟吸取上清液检测；
6.3、处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程，由于蛋白容易变性，降解，故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要，尤其注意不要反复冻融，样本处理之后可分装密封保存，4 度保存应小于 1 周，-20 度不应超过 1 个月，-80 度不应超过 2 个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。
7、牛乳样本：
7.1、将牛乳4°，12000g 离心 30 分钟，去除上层脂肪，以及下层沉淀，取中间层样本用于检测；
7.2、处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程，由于蛋白容易变性，降解，故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要，尤其注意不要反复冻融，样本处理之后可分装密封保存，4 度保存应小于 1 周，-20 度不应超过 1 个月，-80 度不应超过 2 个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。
8、细胞样本
8.1、一瓶细胞，PBS洗2次，胰蛋白酶消化，加入适当培养液，制备成细胞悬液；
8.2、细胞悬液转入离心管中，4℃，2500rpm离心5min；
8.3、弃掉上清，沉淀中加入遇冷的PBS,吹打混匀，4℃，2500rpm离心5min；重复一次这个步骤；
8.4、去掉上清，加入适量细胞裂解液（细胞裂解液中加入PMSF）,置于冰上，裂解30min-1h，裂解过程中可用枪头吹打或间断摇动离心管，使蛋白充分裂解；
8.5、取出离心管，4℃，12000rpm离心5min；
8.6、上清移入EP管中，-20℃保存。 ------------------------------------------------------------------------------
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发表于 2022-1-31 21:51:40
