高效液相色谱的工作原理及常见类型

dxt2020

高效液相色谱HPLC是如何工作的？

在柱层析中，溶剂在重力作用下滴入装有吸附剂的色谱柱中。高效液相色谱是一种改进的柱色谱。在高达400个大气压的高压下，泵输送溶剂通过色谱柱。柱吸附剂或固定相通常是由固体颗粒（如二氧化硅或聚合物）制成的颗粒材料。

与柱色谱相比，利用泵输送，不仅可以快速分析，而且可以使用更小的颗粒作为柱填料。粒子越小，其表面积更大，通过固定相与流动相及样品组分之间的相互作用，可以更好地实现混合物中各组分分离。流动相通常是溶剂（如水、乙腈、甲醇）的混合物。

混合物的组分由于与吸收剂颗粒的相互作用的程度不同而彼此分离，在此过程中不同组分的洗脱速率不同，从而导致组分流出色谱柱时分离。与柱色谱相比，高效液相色谱自动化程度高，灵敏度高。

HPLC工作原理（图片来源：迪信泰检测平台）

高效液相色谱HPLC常见类型有哪些？

最常见的两种HPLC是正相高效液相色谱和反相高效液相色谱。

正相高效液相色谱

柱内填充有微小的二氧化硅颗粒和非极性溶剂，例如正己烷。典型柱的内径为4.6 mm或更小，长度为150至250 mm。混合物中的非极性化合物通过色谱柱的速度更快，因为极性化合物比非极性化合物在极性二氧化硅上的粘附时间更长。

反相高效液相色谱

柱内填充二氧化硅颗粒，并对其进行改性，通过将长的碳氢链（8～18个C原子）附着在其表面来实现其非极性。使用极性溶剂，例如水和醇的混合物，甲醇。由于极性溶剂和混合物中的极性分子之间具有强烈的吸引作用，混合物中的极性化合物将更快地通过色谱柱。非极性分子在通过色谱柱的过程中速度会减慢。它们主要通过范德华分散力和疏水作用与烃基形成不同程度的吸引力。它们在水流动相组分中的可溶性也较低，有助于它们与烃基的相互作用。

反相高效液相色谱是最常用的高效液相色谱。

本文由迪信泰检测平台（Biotech-Pack-Analytical）整理编辑。

迪信泰检测平台基于高效液相色谱HPLC配备以下检测器，可高效、精准的实现近30种类别上千种指标的定量分析：

(1)紫外可见分光检测器(UVD)。

(2)双光路双流路紫外/荧光检测器(UV/FLD-1)。

(3)蒸发光散射检测器(ELSD)。

(4)液相色谱-液相色谱联用(HPLC-HPLC)。

参考资料：Vera Koester. What is HPLC?