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HPLC分类及其原理

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发表于 2020-8-20 15:09:18 | 显示全部楼层 |阅读模式
HPLC分类有很多种,可以根据不同的依据进行分类。
1. 根据流动相和固定相的极性不同,HPLC可以分为正相色谱和反相色谱。
正相高效液相色谱:色谱柱中的固定相是由硅胶、氧化铝等极性化合物组成。当色谱运行时,由于样品中的极性化合物对固定相有较强的亲和力,使它们在色谱柱中的保留时间比非极性化合物长,因此非极性化合物最先被洗脱出来。许多物质都可以用正相色谱法分析,但由于药物、食物和其他生物制品大都是非极性的,所以在日常生活中应用不如反向色谱法广泛。
反相高效液相色谱:固定相由非极性化合物组成,如十八烷基硅烷、C18、C8等有机化合物。流动相是极性的。因此,极性高的化合物最先被洗脱,低极性或无极性的化合物最后洗脱。
HPLC大都是对药物、食品、生化分子等物质进行分析,而它们在自然界中都是极性物质(水溶性)。因此,反相高效液相色谱应用更为广泛。

2. 根据分离原理的不同,HPLC可分为以下六种。
亲和色谱:主要利用样品与固定性之间的亲和性,实现分离。
离子交换色谱:基于固定相与流动相的带电基团发生可逆交换,达到分离目的。离子交换树脂用于分离含有带电离子的样品。对于阴离子,使用阴离子交换树脂;对于阳离子,使用阳离子交换树脂。主要用于分离酸性和碱性化合物。
离子对色谱:在反相色谱的流动相或固定相中加入离子配对剂,与样品中可电离的成分形成“对离子”。常用的离子配对剂有戊烷、己烷、庚烷或辛烷磺酸盐等。
吸附色谱:是利用吸附性不同的原理,根据样品中的组分对固定相的亲和力不同而发生分离。
空间排阻色谱:按样品中的组分的分子大小顺序进行分离。色谱柱是由琼脂糖、葡聚糖、聚丙烯酰胺等软凝胶制成,也可用烷基葡聚糖、聚苯乙烯等半刚性凝胶。
手性色谱:用于分离样品中的光学活性异构体。固定相采用化学键合硅胶。常应用于医药、生物等领域。

3. 根据分析目的不同,HPLC可以分为分析型液相色谱和制备型液相色谱。
分析型液相色谱:主要利用检测器对混合物中各组分进行定性和定量分析。
制备型液相色谱:主要是对混合物中各组分进行分离纯化。制备型的色谱柱和进样量都比分析型大。

4. 正如大家所知道的,混合物的分离是由于流动相流过HPLC色谱柱完成的,其中流动相可以是单一的溶剂,也可以是混合溶剂,因此HPLC可以分为等度洗脱和梯度洗脱两种类型。
等度洗脱:只有一种溶剂,所有的操作都是在一种溶剂下进行的。
梯度洗脱:流动相由两种或两种以上的溶剂组成,并不断改变其浓度配比。

迪信泰检测平台以液相/气相为依托,组建国际领先的HPLC、LC-MS、GC-MS等检测平台,为广大科研工作者提供高质量、快速、精准的一站式检测服务,涉及生物、食品、药物、化妆品、环境等多领域。

参考资料:Types Of HPLC | Their Principle And Application
本文由迪信泰检测平台(Biotech-Pack-Analytical整理编辑。未经允许,不得转载


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