提高化学发光免疫分析仪准确度、重复性的校准方法

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自公元前数百年就存有生物发光情况的相关记录，人们发觉自然环境下很多真菌、细菌等均存在发光现象，只是发光强度较低，人视网膜可感知度仅为10-3～10-4，需利用光电倍增管进行放大扩大感知强度。随着科学技术水平的不断提高，至近20年，人们提出借助发光进行化学分析这一理念，尤其是近10年，将免疫检测与化学发光结合在一起，诞生了发光免疫技术，该技术迅速在免疫学及医学界得到普及应用。与其他医学检验相同，免疫检验结果的准确性对医疗质量具有总要影响，对其造成影响的因素一般分为3个阶段，即标本分析前阶段、标本分析中阶段与标本分析后阶段。唯有合理控制检测过程中各阶段质量，才可以缩减误差，确保最终结果准确。但通过查找检索相关资料发现，我国目前对化学发光免疫分析仪的校准方法尚无明确规定，而相关机构越来越需要相关校准检测，所以，深入研究此设备仪器的校准方法势在必行。以下对该仪器校准方法相关内容进行论述，仅供参考。


1，化学发光免疫分析仪工作原理
在20世纪90年代提出化学发光免疫分析系统，至今全球仅有BECKMAN公司、BAYER公司等少数制造商可以单独生产此类设备。我国目前对此系统进行研制的机构有浙江工业大学、中国原子能科学院等，但目前依旧处在实验模拟阶段。
化学发光免疫分析仪指的是通过发光剂对抗体进行直接标记施行免疫分析法所需的分析仪器。而免疫分析的原理为：化学反应检验过程中，部分化学基经氧化作用后呈激发态，当返回原始基态时同步发射固定波长的光子，在需进行免疫分析的抗体或抗原上标记此类化学基团，由此形成的非放射免疫分析统称为化学发光免疫分析。该免疫分析方法优势在于特异性强、灵敏度高、准确性好、适用范围广、操作简单，试剂价格低等。医学界已将其视为一种非同位素标记免疫分析的重要方法。但需注意，因为化学发光免疫分析仪本身自动化水平强、检测灵敏度高，所以其准确度评价仅采取标准生化试剂在被检分析仪上遵照操作说明多次重复检测，视其检测结果与标准生化试剂靶值是否符合。


2，校准试剂、设备及工作环境
（1）校准试剂、设备。校准试剂选择标准生化试剂，为不确定度0.3%的免疫质量控制血清。校准设备包括有：A级50mL移液管，25mL量杯，A级0.25mL分度吸管，1kW，220V电子交流稳压器，混匀器等。
（2）校准工作环境。一般选择室内校准环境，温度控制在（15～25）℃，相对湿度控制在低于80%。保证室内环境整洁、做好防尘，同时对电源电压使用电子交流稳压器进行稳压。需注意的是，应尽量远离强电磁场干扰区域。


3，校准项目及方法
3.1外观
利用直观目测法对分析仪的表面涂漆、镀层、剥离器件等进行检查，保证分析仪不存在影响工作性能的机械性损伤。用手轻拨动仪器各开关、旋钮，检查其紧固情况，同时将其调制准确位置。保证样品台整洁、平稳。分析仪应附带齐全的说明书、合格证书及相应配套附件，铭牌字迹应清晰无污染，标有生产日期、型号、厂名、编号等内容。
3.2校准准确度
校准分析仪前应平衡标准生化试剂、分析仪及校准室内间的温度，时间约为2h，连通电源进行设备预热，时间为15min，根据说明书预调分析仪各处旋钮、开关至指定位置。进行标准液的配置，选用多项目免疫质量控制血清校准发光免疫分析仪的准确定，并进行重复性校准。使用移液管及分度吸管取质量控制血清5mL，同时取复溶液5mL，同时置入25mL量杯内。将该量杯放于混匀器内进行混合，时间为30s，遵照常规检测方法使用分析仪进行检测，连续重复6次，将首次检测结果舍去，剩余数据记录至记录表内，计算取平均值，与标准生化试剂证书内的靶值进行比较，判断其符合程度。当检测结果符合标准生化试剂证书内靶值要求同时优于10%以上视为仪器准确度校准完成。
3.3重复性校准
将分析仪调节好，断开电源开关后复脸启动，测量校准液，再次重复上述操作，检测6次，去除首次检测结果，记录后续数据计算标准偏差，判定结果与标准生化试剂靶值要求是否符合。
依据格拉布斯准则去除可疑数值后按照式（1）计算变异系数。

重复性应符合标准试剂靶值要求并＜5%。待仪器设备精确度校准、重复性校准完成后做好检测报告，同时注明校准结果。每间隔一段时间需对分析仪进行校准，周期控制在1年以内。
3.4化学发光免疫分析仪校准过程中的注意事项
（1）进行校准期间应选择相同类型的免疫质量控制血清标准物进行检测，不可多种血清混合使用。
（2）免疫质量控制血清的稀释倍数及复溶应严格遵照使用说明书的内容操作，不可随机更改数值。
（3）配置校准过程中的复溶液时应使用相同液体，不可选择
其他液体替换。
（4）校准完成后剩余质量控制血清应妥善处理，不可留用于隔日测量，这是由于试剂内部分反应物存在不稳定的化学性质，极易扩散至溶液内，形成污染影响检测结果。




4，总结
化学发光免疫分析仪通常作为一项检测病患血清，分析人体免疫情况的检验仪器。化学发光免疫测定属于一类敏感度高的微量测定技术，医学普遍用于测量肿瘤标志物、甲状腺激素标志物等。时至今日，免疫分析历经了放射免疫分析、荧光免疫分析、酶标免疫分析等各个阶段，化学发光免疫分析成为新的发展阶段，其凭借快速、高效、精准、环保等优势深受检验者的认可。其能够将化学标记、电子标记、智能计算控制三者结合，以此用于开展化学发光免疫分析、细胞发光分析、微生物发光分析等。由于其设备及工作原理的特殊性，我国尚未对其校准方法有明确规定，所以亟待对此内容深入研究。从工作原理、校准试剂、设备及工作环境、校准项目及方法等3方面进行阐述，目的在于提高免疫分析质量，推动我国免疫学及医学进一步发展。

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