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Frdbio® HABA法生物素标记效率检测试剂盒

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发表于 2021-11-10 16:16:27 | 显示全部楼层 |阅读模式

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[url=]2-[/url](4-羟基苯偶氮)苯甲酸(2-(4-Hydroxyphenylazo)benzoic acid ,英文缩写HABA)可以与亲和素特异性结合,其结合复合物为一种黄色或者橘黄色,在500nm有最大吸光值;但是其结合力远远低于生物素与亲和素的结合,当溶液中存在生物素的时候,生物素会强竞争让HABA解离下来,引起吸光值下降。基于此原理,可以根据500nm吸光值的变化计算出蛋白标记生物素的量(被标记蛋白与生物素的摩尔比)。

生物素标记摩尔比的计算是基于比尔-朗伯定律(Beer–Lambert law),又称比尔定律或比耳定律(Beer's law),是分光光度法的基本定律,即当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时,其吸光度(Absorbance,A)与吸光物质的浓度(Consenreation,C)及吸收层厚度(length,L)成正比, 用公式表示为:A = ε*C* L其中A为光度,ε为摩尔吸光系数,所以此处公式为A 500= ε500 C L(此处ε500=34,000M-1cm-1)

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