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自身抗体检测是诊断自身免疫性疾病（autoimmune disease，AID）的重要手段，常用检测方法有间接免疫荧光（IIF）法、酶联免疫法（ELISA）、免疫印迹法等，随着生物技术不断革新，自动化、检测准确度更高的磁珠微粒化学发光、免疫微阵列、流式免疫荧光等技术也逐渐应用于自身抗体检测。但间接免疫荧光法因其检测抗原的全面性，一直是应用最为广泛的血清学检测技术。间接免疫荧光法是患者血清中存在的特异性自身抗体与细胞及组织基质中的抗原结合，再用荧光素标记的抗人IgG抗体与抗原抗体复合物结合，在荧光显微镜下发出特征性的绿色荧光而被检测到。实现IIF的全自动化，并在此基础上逐渐实现全过程的标准化是今后的发展趋势。
一自身免疫性疾病概述
自身免疫性疾病是指由于某些原因造成免疫系统对自身成分的免疫耐受减低或破坏，致使自身抗体或/和致敏淋巴细胞损伤自身器官组织而引起的疾病，表现为相应组织器官的功能障碍。AID种类很多，根据损伤所涉及的组织或器官，可分为器官特异性自身免疫性疾病（局限某特定器官，如自身免疫性肝炎）和系统性自身免疫性疾病（病变见于多种器官及结缔组织，如系统性红斑狼疮）。近年来，由于人类对AID认识的提高，加之临床经验的积累和实验室诊断技术的进步，AID发病检出率明显上升，流行病学研究显示，AID在世界范围内的患病率已达3%~5%。AID异质性很强，患者的临床表现有时不典型甚至无任何症状和体征，尤其是在疾病的早期阶段，这就使得AID的疾病的早期诊断变得困难。当前，AID的诊断主要依赖实验室检查，其中自身抗体检测是临床应用最多的辅助诊断工具。
自身抗体的检测是临床确诊AID的重要依据，每种AID都伴有特征性的自身抗体谱。测定自身抗体有助于AID的诊断，并对判断疾病的活动度、观察治疗效果、指导临床用药具有重要的临床意义。此外，一些自身抗体在疾病症状出现前几年就升高，可起到疾病预测作用。
二自身抗体的间接免疫荧光法检测方法
自身抗体的检测方法都是基于抗原抗体反应。由于抗原包被的载体和形式的不同，抗原抗体结合反应标记方式不同，自身抗体的检测方法非常丰富，常用的有间接免疫荧光(IIF)法、酶联免疫法（ELISA）、免疫印迹法、免疫扩散法等，其中，部分的检测方法敏感性、特异性较低，而且多数检测方法都是手工操作。手工操作的操作过程存在个体差异，检验结果受主观因素影响大，常出现同一项目、同一检验方法，两个实验室之间的检测结果有差异，在患者转院的过程中会给临床医生的诊断带来困惑。为了满足临床自身抗体检测的特异性和准确性的需要，磁珠微粒化学发光、免疫微阵列、流式免疫荧光等技术逐渐应用于自身抗体检测。
虽然生物化学技术的不断发展，新的检测技术不断涌现且日益成熟，但是依然无法撼动间接免疫荧光法在自身抗体检测中无法取代的重要地位。间接免疫荧光法不仅在过去，乃至今天仍然是一种非常先进且极为可靠的血清学检测技术，已广泛应用于AID的实验室诊断，其重要性备受严谨的实验室工作者的认同。对于自身抗体检测，应首选间接免疫荧光法作为理想的筛查实验。美国风湿病学会（ACR）明确指出：以人喉癌上皮细胞（HEp-2）细胞作为基质的IIF法是检测抗核抗体（ANA）参考方法。而此方法结果的准确性除了取决于荧光载片的质量、操作过程的准确，更重要的是实验室专业人员利用荧光显微镜荧光载片的结果判读。由于实验室工作人员对于样本荧光核型的判断容易出现错判或漏判，而对于滴度的判断容易高判或弱判，目前人工实验滴度准确判断的唯一途径是梯度稀释法，不仅浪费时间、试剂，且临床应用极少。所以，实现自身抗体的全自动间接免疫荧光法检测（载片处理和结果判读（阴阳性、滴度、核型）集于一体）并在此基础上逐渐实现全过程的标准化是检验工作者梦寐以求的，也是今后的发展趋势，大量的研究也正朝着这个方向努力。
三全自动间接免疫荧光检测平台
令人可喜的是，针对自身抗体的间接免疫荧光检测已经出现了全自动化仪器，这就是全自动荧光免疫分析仪检测技术平台（HELIOS），该平台2014年由广州康润公司从德国AESKU公司引进国内，HELIOS高效整合了载片条码阅读器、样本条码阅读器、LED显微镜、高清摄像头等精密装置，结合数字化处理软件,可实现自身抗体间接免疫荧光实验前端染色与后端图像采集、结果判读（阴阳性、滴度、核型）的全自动处理，简化实验流程。通过实验操作和结果判读的全过程自动化，所有实验过程均全部记录储存可完整回溯，疑难结果可由专家进行远程和补充会诊确认；而不同实验室间采用该系统可实现室内结果稳定和室间结果无差别互认，同时，全自动荧光免疫分析仪采用国际传统滴度，滴度参考溯源美国CDC/CAP国际标准，这对于间接免疫荧光法的标准化是一个显著进展。
在荧光实验的效率与准确性的基础上，由于减少了人工结果干预，尤其是滴度判读，可减少病人前后实验结果的的人工判断误差，并且可参与相关实验室的结果比对，符合国家对于提高不同实验室结果互认的要求，也大大降低了病患医疗花费，提高结果的临床认可度。可通过内置模块参与网络实验结果讨论，在实验结果基础稳定的条件下，大大提高内部人员培训的效率及与先进医院的互相学习与支持。
国内，由南方医科大学南方医院牵头广东省8家大型单位参与的广东省抗核抗体（ANA）间接免疫荧光标准化多中心研究结果表明，该全自动荧光免疫分析仪可替代手工操作，可提高实验室间检测结果的一致性，且结果更为可靠，判读标准更客观，有助于室间结果互认。
总而言之，实验室检测，尤其是自身抗体检测，对于AID的诊疗至关重要。实现自身抗体检测的自动化、标准化检测是检验工作者追求的目标，规范化实验检测流程，提供标准化的检测路径，对检测结果进行智能分析，为临床医生诊断提供准确、可靠的依据。 ------------------------------------------------------------------------------ End
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发表于 2020-6-21 11:48:04