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来源：洛阳爱森生物
PCR，qPCR， RT-PCR，qRT-PCR Real-time PCR
还分不清楚？
什么是PCR？
PCR，指聚合酶链式反应，是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术， PCR的最大特点是能将微量的DNA以指数级增加。 得到高拷贝数的DNA之后，普通PCR需要通过凝胶电泳进行下一步检测。
标准的PCR过程分为三步：
01
DNA变性（90℃-96℃）
双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。
02
退火（60℃-65℃）：
系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。
03
延伸（70℃-75℃）：
在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸，合成与模板互补的DNA链。
什么是qPCR？
qPCR，指实时荧光定量PCR，也叫作Real-time PCR，是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。
也就是说：qPCR就是Real-time PCR
qPCR一般有两种类型
01
DNA结合染料法
以SYBR Green I法举例，在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
02
基于探针的化学法
以TaqMan探针法举例，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。
什么是RT-PCR？
RT-PCR，指逆转录PCR或者反转录PCR，是一种用于放大扩增特定的RNA片段的分子生物学技术。先将RNA单链逆转录为互补DNA（cDNA）后，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。
那么举一反三，qRT-PCR指实时荧光定量逆转录PCR。经过逆转录得到互补DNA（cDNA）后，再进行qPCR。 | 
发表于 2023-6-17 16:38:44