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胶乳微球 -物理吸附粒子 抗体偶联反应方法

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发表于 2023-7-20 16:27:29 | 显示全部楼层 |阅读模式
来源:长濑体外诊断IVD


物理吸附 抗体吸附反应方法(示例)

1、材料
◆聚苯乙烯胶乳粒子(10 wt%产品)
◆反应缓冲液;10 mM HEPES (pH 7.0)
 50mM磷酸及硼酸、甘氨酸溶液亦可
 pH6~8之间最适宜
◆抗体;精制抗体 /PBS(尽量3mg/mL以上)
◆封闭液;1 wt% BSA /10 mM MES(pH 6.5)
◆试剂保存液;0.1wt%BSA、10 mM HEPES(pH 7.0)、3%蔗糖、0.09%NaN₃ etc.

2、抗体吸附反应示例
1)向微管中加入10%胶乳原液50μL,反应缓冲液950μL,并稀释至0.5wt%(5 mg/mL)
2)参考表格,适量添加抗体,用超声波装置分散,混合1小时(室温)
3)参考表格进行离心并去除上清
4)加入1mL封闭液,使用超声波装置再次进行分散后,去除离心上清(去除未吸附抗体)
5)加入1mL封闭液,使用超声波再次进行分散后,混合1小时(室温~50℃)
6)离心并去除上清
7)在试剂保存液中,进行分散,使其变为可发挥试剂性能的浓度

变更调制量时,请适当调整最佳抗体量、离心时间。
粒子直径
100nm
200nm
300nm
添加抗体量
(0.5wt%1mL)
0.7mg
0.4mg
0.3mg
离心条件
20,000G
(15,000rpm)
20,000G
(15,000rpm)
20,000G
(15,000rpm)
离心时间
1小时以上
约30分钟
约20分钟
※上述表格基于粒子表面积计算得出,数值为大概标准,请知悉。

理微球与化学微球的性质:
物理微球较化学微球灵敏度高,但操作难度较大

物理
因微球本身具有疏水性,疏水性的各粒子形成了易于结合的环境。
抗原抗体反应
粒子自身持有的凝集倾向
高敏感度

化学
功能基与水融合,粒子本身的凝集力降低。
凝集反应仅有抗原抗体反应的作用=常规敏感度

对于偶联的操作性和分散稳定性,
化学方式容易些。

物理微球与化学微球的区别(假设/形象图)

FC部分因具有疏水性,
易吸附于Lx?

化学粒子~COOH基量与试剂性能~

聚苯乙烯粒子与大量的酸共聚合时,理论上,按照COOH基量的比例,抗体进行化学结合。

*变得更易溶于水,粒子凝集力下降
*聚苯乙烯高折射率的的性质丧失(配比率的数倍)
不利于试剂性能的提高

微球总结
微球
种类
微球
直径
功能基
种类
抗体结合方式
用量
物理吸附用
粒子
50-400nm
磺酰基、
羟基
物理吸附(静电、疏水性的结合)
500 mL~
化学结合用
粒子
100-400nm
羧基
共价键
500 mL~
如通过样品评价,可确认试剂性能,则可以对最终粒子直径进行微调。

藤仓化成胶乳微球小结
  • 根据目前测试情况,化学羧基微球方面对于小粒径的微球,羧基比例高一些的实测效果更好些(比如FK-C100E/120E),对于粒径比较大的微球,羧基比例低一些的实测效果更好些(比如FK-C300D/350D/400D)
  • 物理吸附微球方面FK-S100D/S120D/S200D/S300D使用性能比较优异。


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