本帖最后由 biobridge 于 2023-8-18 10:33 编辑
THYROXIN 4 ANTIBODY 甲状腺素抗体
甲状腺素（Thyroxin，T4）是甲状腺分泌的激素之一。在正常生理条件下，血液中约99.95%的T4与甲状腺素结合蛋白（TBG）结合起来，只有0.05%游离态T4（FT4）具有生物学活性。临床检验项目甲功五项包括游离三碘甲腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、总甲状腺素（TT4）、总三碘甲腺原氨酸（TT3）、促甲状腺素（TSH）五项指标，它与甲状腺功能有密切关系，是诊断甲状腺功能亢进症、甲状腺功能减退症的重要依据。 目前，检测人血清中T4浓度的方法有色谱法、放射免疫法、酶免法。色谱法准确可靠，是其他测定T4方法的参考标准，但是这种方法费时、费用高，不适合于常规临床实验室常规检测病人。放射免疫法所用试剂具有放射性同位素，存在安全问题，不易被广泛应用于临床检测。酶免法避免了以上两种方法的弊端，便于在基层医院普及和推广，其中化学发光酶免法成为主流。而建立酶免法的关键在于制备出特异性强、亲和力高的单克隆抗体。
我公司自主研发的抗甲状腺素（T4）单克隆抗体有两株，抗体克隆号分别是1E10和9C6。9C6的检测灵敏度高，与样本的检测相关性在0.95左右（检测FT4浓度）。1E10效价高，用户在使用过程中可减少抗体的使用量，降低原料成本，与样本的检测相关性在0.95左右（检测TT4浓度）。 ● 佰桥产品自信
产品货号： | | M-1171-9C6 | 使用方法： | 标记、包被 | 应用平台：
| 胶体金、荧光层析、化学发光 |
实验一 抗体9C6用于标记检测FT4（化学发光）
实验方法： 采用竞争法，在板式化学发光平台上检测血清样本的发光值，做出发光值与血清样本中FT4浓度（西门子试剂盒测定）的相关性曲线。
包被 将T4-BSA包被于微孔板上，包被浓度0.5μg/mL，每孔加入100μL，4℃包被过夜；
封闭 将微孔板清洗3遍后，每孔加入200μL的封闭液，37℃封闭2h，洗板3遍；
加样 每孔分别加入50μL血清样本，再加入100μL HRP-9C6(1:40000稀释)，37℃孵育60min；
加入发光液 洗板4遍后，每孔加入100μL发光底物，室温避光反应5min；
读数 化学发光检测仪检测发光值； 实验结果： 检测数据 曲线拟合： 以FT4浓度（单位pmol/L）为X轴，发光值为Y轴，做四参数Logistic曲线拟合，如下图所示：
四参数Logistic曲线拟合方程: y = (A - D) / [1 + (x/C)^B] + D A = 616555.32189 B = 1.50884 C = 13.20267 D = 166.99578 R2= 0.98893 实验结论 在化学发光平台上，自产抗体9C6用于标记，检测血清样本的发光值与血清样本中FT4浓度（西门子试剂盒测定）的相关性R2＞0.95。
实验二 抗体9C6用于包被检测FT4（化学发光）
实验方法： 采用竞争法，在板式化学发光平台上检测血清样本的发光值，做出发光值与血清样本中FT4浓度（西门子试剂盒测定）的相关性曲线。
包被 将9C6抗体包被于微孔板上，包被浓度2μg/mL，每孔加入100μL，4℃包被过夜；
封闭 将微孔板清洗3遍后，每孔加入200μL的封闭液，37℃封闭2h，洗板3遍；
加样 每孔分别加入50μL血清样本，再加入100μL HRP-T4(适当稀释)，37℃孵育45min；
加入发光液 洗板4遍后，每孔加入100μL发光底物，室温避光反应1-3min；
读数 化学发光检测仪检测发光值； 实验结果： 检测数据: 曲线拟合： 以FT4浓度（单位pmol/L）为X轴，发光值为Y轴，做四参数Logistic曲线拟合，如下图所示：
四参数Logistic曲线拟合方程: y = (A - D) / [1 + (x/C)^B] + D A = 701755.87902 B = 1.03322 C = 38.24979 D = -172362.71044 R2= 0.97746 实验结论 在化学发光平台上，自产抗体9C6用于包被，检测血清样本的发光值与血清样本中FT4浓度（西门子试剂盒测定）的相关性R2＞0.95。
实验三 抗体1E10用于包被检测TT4（化学发光）
实验方法：
采用竞争法，在板式化学发光平台上检测血清样本的发光值（样本需要解离），做出发光值与血清样本中TT4浓度（西门子试剂盒测定）的相关性曲线。
包被 将1E10抗体包被于微孔板上，包被浓度0.5μg/mL，每孔加入100μL，4℃包被过夜；
封闭 将微孔板清洗3遍后，每孔加入200μL的封闭液，37℃封闭2h，洗板3遍；
加样 每孔分别加入50μL血清样本，再加入100μL HRP-T4(适当稀释)，37℃孵育45min；
加入发光液 洗板4遍后，每孔加入100μL发光底物，室温避光反应1-3min；
读数 化学发光检测仪检测发光值； 实验结果： 检测数据: 曲线拟合： 以TT4浓度（单位nmol/L）为X轴，发光值为Y轴，做四参数Logistic曲线拟合，如下图所示：
四参数Logistic曲线拟合方程: y = (A - D) / [1 + (x/C)^B] + D A = 945011.89147 B = 0.93002 C = 122.76832 D = -101349.90267 R2= 0.98065 实验结论
在化学发光平台上，自产抗体1E10用于包被，检测血清样本的发光值与血清样本中TT4浓度（西门子试剂盒测定）的相关性R2＞0.95。
实验四 抗体1E10用于标记检测TT4（荧光层析）
实验方法：
包被T4-BSA，1E10用于标记，采用竞争法，在荧光层析平台上检测血清样本的荧光强度T/C（样本需要解离），做出荧光强度T/C与血清样本中TT4浓度（西门子试剂盒测定）的相关性曲线。 实验结果： 检测数据: 曲线拟合： 以TT4浓度（单位nmol/L）为X轴，荧光强度T/C为Y轴，做四参数Logistic曲线拟合，如下图所示：
四参数Logistic曲线拟合方程: y = (A - D) / [1 + (x/C)^B] + D A = 3.59163 B = 0.49843 C = 5.21878 D = -0.27958 R2= 0.95689 实验结论
在荧光层析平台上，自产抗体1E10用于标记，检测血清样本的荧光强度T/C与血清样本中TT4浓度（西门子试剂盒测定）的相关性R2＞0.95。
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发表于 2023-8-18 10:23:40
