根据联防联控机制综发[2020]181号文件要求：“各地要加强三级医院、传染病专科医院、县（区）级及以上疾控机构、海关及有条件的县医院实验室建设，使其具备开展新冠病毒检测能力”。近期各医院都在进行PCR实验室的建设工作，通过一些医院的自查，其中发现还是仍存在一些问题。
一、选址 PCR实验室应相对独立，尽量避免与其他普通实验套叠或者有通道上的交叉。笔者看过一个图，他们的PCR实验室设置在检验科的最里面，医废和标本的运送要穿过检验科的整个走廊，这种情况人流、物流、污物均在同一个通道，交叉感染风险较高，应尽量避免。
二、设置区域 PCR实验室应设置以下区域：试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。这个4个区域在物理空间上必须完全独立，各区域无论是空间上还是在使用中，应当始终处于完全的分割状态，不能有空气的直接相通。根据使用仪器的功能，区域可以适当合并。每个区域间设置传递窗，要求一侧打开时另一侧无法打开。4个区域应设置独立的缓冲间，应设置可以通到四个操作区域的PCR走廊，在进入各区域前，应设置更衣间，每个区域的衣服可用不同颜色进行区分，在清洁区应设置洗澡间、卫生间、值班室。还应考虑到医废和标本的运送通道。
三、空气流向 PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为了避免各个实验区域间交叉感染的可能性，通风方式应为机械通风，不应自然通风，且不宜使用循环风。同时要严格控制送、排风比例以保证各试验区的压力要求。
PCR实验室的空气流向应按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区进行，防止扩增的产物顺空气气流进入扩增前的区域。可选择负压排风装置，核心区域相对于相邻区域最小压不小于-10Pa。也可通过安装排气扇或者其他方式实现。PCR实验室要求温度18~26℃，相对湿度30%~70%。
四、院感管理 1.进入各工作区域应当按照单一方向进行，即试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区。
2.各区域的设备、清洁用具标记明确，不得混用。
3.各区域的衣服用不同颜色标记，离开各区域时不得将工作服带出。
4.试验台用移动式紫外线灯消毒，高度60-90cm。扩增区延长照射时间，最好是过夜照射。同时各区域还需安装悬挂式紫外线灯管。
5.各试验区尽量避免不必要的走动和进出，减少交叉感染风险。
6.扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质，应特别注意实验人员的安全防护。
7.试剂储存和准备区：本区域对压力没有明确要求，储存试剂和用于标本制作的消耗品等材料应当直接运送至该区，不得经过其他区域；试剂盒中的阳性对照品及质控品不应当保存在该区，应保存在标本处理区。
8.标本制备区：相对于临近区域应为正压，以避免临近区域进入本区的气溶胶污染。
9.扩增区：相对于临近区应为负压，为避免气溶胶所致的污染，应当尽量减少在本区域内的走动。必须注意的是，所有经过检测的反应管不得在此区域打开。
10.扩增产物分析区：相对于临近区域应为负压。本区域是最主要的扩增产物来源，因此必须注意避免通过本区域扥物品带出。废液必须收集至1mol/L的HCl中，并且不能在实验室内倾倒，而应在远离实验室的地方倒掉。用过的吸头也必须放至1mol/L的HCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序处理，如焚烧等。本区域需要配置高压灭菌锅用以灭活扩增后的标本。
来看一个PCR实验室布局图：
最近看到的一些医院的设计稿基本都是这个样子。这个布局在院感上明显的不符合“三区两通道”的要求：只有污染区（四个操作间）、潜在污染区（PCR走廊）、没有清洁区（洗澡间、值班室），没有医废通道和标本运送通道，没有更衣间来穿戴防护用品，穿脱防护用品、可复用防护用品的浸泡、清洁用具存放均在狭小的缓冲间进行。
各医院的PCR实验室的建设主要还是参考《医疗机构基因扩增检验实验室工作导则》（2010版），该导则重点强调了实验操作区域的设置，未考虑到感控的部分流程。因此，建议各医院设计PCR实验室时还是需要感控专职人员提前介入，以免建好之后再改建，延长工期、浪费财力。
五、临床基因扩增检验实验室的环境清洁 《临床基因扩增实验室工作规范》中有对物表清洁、消毒的要求，不同的实验区域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染。- 基本原则：由清洁区向污染区进行，洁具不可交叉。
- 清洁消毒方向：准备区→标本制备区→扩增区→产物检测区
- 清洁消毒范围：工作区域的物体表面(含桌、椅)，可使用含氯消毒剂擦拭消毒，空气和工作台面可使用紫外线照射消毒，也可使用空间消毒器进行全环节消毒。
- 不可使用紫外线消毒器及化学消毒进行有人状态下的消毒。
- PCR室内的消毒应防止扬尘（减少人员走动）、杀灭DNA或RNA的基因片段。可选择悬挂紫外线灯管进行空气消毒，试验前照射30-60分钟，实验结束照射30-60分钟，必要时延长照射时间（可照射一夜）。
- 终末消毒：当出现实验室污染时，应按要求立即撤出相关人员，在无人情况下可使用化学消毒剂进行终末消毒，如熏蒸法：过氧乙酸1g/ m³加热熏蒸（湿度70-90%），密闭24小时；气溶胶喷雾：3%过氧化氢：20mL/m³气溶胶喷雾；5%过氧乙酸2.5mL/m³气溶胶喷雾（湿度20-40%）。
日常清洁消毒应该如何做？- 每日工作前后，对工作区域表面、地面进行清洁并消毒，使用含氯消毒液擦拭。清洁采用湿式、不扬尘的方式进行。
- 物品防尘存放。墙面定期清洁，有可见污染及时进行清洁消毒。
- 配备移动紫外线消毒装置进行空气和物表的消毒。
- 生物安全柜的消毒：
- 每天工作前：对生物安全柜的内表面进行消毒，包括工作台面和内壁使用消毒剂擦拭。
- 工作结束：柜内物品全部消毒后移出。消毒剂擦拭台面四周、以及玻璃内侧灯部位。
- 消毒剂应选择能够杀死生物安全柜里可能发生的任何微生物（70%乙醇、含氯消毒剂）。在使用漂白剂等腐蚀性消毒剂后，还应用无菌水再次进行擦拭。
- 停用生物安全柜前，运行5min以净化内部空气。
- 终末消毒：需要进行终末消毒的时机：生物安全
试验完成后，物品及环境如何处理？- 做好废液及固废处理；
- 实验室空间消毒：在室温，50-60%湿度条件下，使用过氧乙酸熏蒸2g/m³，过夜；或使用20g/l气溶胶喷雾，用量8g/m³；
- 物体表面消毒液：0.55%含氯消毒剂，现用现配，24小时内使用。
参考文献：
1.《关于加快推进新冠病毒核酸检测的实施意见》联防联控机制综发[2020]181号
2.《医疗机构基因扩增检验实验室工作导则》（2010版）
3.《医疗机构基因扩增管理办法》（2010版）
4. 医学生物安全二级实验室建筑技术标准T/CECS662-2020
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发表于 2020-6-30 08:22:37